Глюкозын оксидазын глюкозыг тодорхойлох арга

Аргын зарчим. Энэ арга нь глюкозын оксидазын ферментийн үйл ажиллагааны өвөрмөц байдалд суурилдаг. Энэхүү энзим нь молекулын хүчилтөрөгчийн оролцоотойгоор глюкозыг исэлдүүлдэг бөгөөд аяндаа глюконины хүчил рүү гидролиз болдог. Глюкозын оксидаза нь глюкозыг исэлдүүлж устөрөгчийн хэт исэл (H) үүсгэдэг₂Өө₂) пероксидазын нөлөөн дор 4-аминоантипирин ба фенолтой урвалд ордог. Үүний үр дүнд 510 нм хэмжээтэй оптик нягтрал нь дээж дэх глюкозын агууламжтай пропорциональ байдаг ягаан өнгийн нэгдэл үүсдэг.

глюкоз + О₂ + Ө₂Өө → глюконы хүчил + H₂Өө₂

2 N байна₂Өө₂ + 4-аминоантипирин + фенол → хинонимин + 4Н₂Өө

Тоног төхөөрөмж CPK, центрифуга, термостат, тавиур, туршилтын хоолой, пипетк, биологийн материал, ажлын уусмалд агуулагдах урвалжууд.

туршилтын дээж, мл

стандарт дээж, мл

сул зогсолт (N₂О), мл

Глюкозын тохируулгын уусмал (лавлагаа)

Хоолойг термостатад 15 минутын турш 37 градусын температурт өсгөвөрлөж, хоосон дээжийн эсрэг 5 мм-ийн зузаантай кабелаар ногоон шүүлтүүр бүхий CPC дээр өнгөөр ​​хэмждэг.₂О). Инкубаци хийснээс хойш 1 цагийн турш ягаан өнгө тогтвортой байна.

Тооцоолол глюкозын агууламжийг дараахь томъёогоор гаргана.

С =x C стандарт хаана

C нь туршилтын дээж дэх глюкозын агууламж, моль / л,

Эпээ - дээжийн оптик нягтрал,

Мах иддэг - тохируулгын дээжийн оптик нягт,

С стандарт - тохируулгын уусмал дахь агуулга, моль / л.

Хэвийн утга:  нярай хүүхэд - 2.8-4.4 ммоль / л

 хүүхдүүд - 3.9 -5.8 ммоль / л

 насанд хүрэгчид - 3.9 - 6.2 ммоль / л

Гипогликеми (GHC).Цусан дахь сахарын хэмжээ ихсэх нь олон шалтгаанаас үүдэлтэй бөгөөд үүнээс үзэхэд гипергликемийн хоёр бүлгийг ялгадаг.

1. Инсула - бие махбодид инсулин хангалтгүй байгаагаас эсвэл түүний үйл ажиллагааны үр дүн муутай холбоотой.

2. Экстрасуляр (экстрасуляр) - инсулины нөлөөллөөс хамаардаггүй.

HHC үүсэхэд дараахь үйл явцууд хамгийн чухал байдаг: гликогенийн задрал, неоглюкогенез нэмэгдэх, гликоген синтезийг дарангуйлах, дааврын инсулин антагонистуудын нөлөөн дор эд эсийн глюкозын хэрэглээ буурах: соматотропин, глюкортикоид, тироксин, тиротропин.

Цусан дахь глюкозын хэт их хэрэглээ (жишээлбэл, элсэн чихрийн ачаалал бүхий гипергликеми) -ийг хоол тэжээлийн гипергликеми гэж тэмдэглэдэг. "Элэгний" гипергликеми нь элэгний сарнисан хэсэгт тохиолддог.

Тогтмол ба хүнд хэлбэрийн гипергликеми ихэвчлэн чихрийн шижин дагалддаг. Энэ нь инсулинаас хамааралтай чихрийн шижин, инсулинээс хамааралтай чихрийн шижин өвчнийг тусгаарлах явдал юм. Өөрөөр хэлбэл чихрийн шижин I хэлбэр ба II хэлбэрийн чихрийн шижин. I хэлбэрийн чихрийн шижин үүсэх нь инсулины синтез болон метаболизмын үйл ажиллагааны алдагдалтай холбоотой байдаг.

Хоёрдахь бүлгийн гипергликеми нь гормон үйлдвэрлэдэг дотоод шүүрлийн булчирхайн гиперфункцтэй холбоотой байдаг - инсулины антагонистууд. Энэ нь Иценко-Кушингын хам шинж ба өвчин, акромегали, тиротоксикоз, феохромоцитома, глюкоганома зэрэг өвчний үед ажиглагддаг. Цусан дахь глюкозын хэмжээ элэгний тодорхой өвчин (ялангуяа элэгний циррозтой өвчтөнүүдийн 10-30% -д), гемохроматоз (элэгний хатуурал, хүрэл чихрийн шижин) нэмэгддэг.

Гипогликеми (GPG) - Цусан дахь глюкозын хэмжээ буурах нь ихэвчлэн цусан дахь инсулины хэмжээ үнэмлэхүй эсвэл харьцангуй ихэссэнтэй холбоотой байдаг. Цочмог ба архаг гепатит, цирроз, элэгний цочмог ба субакут элэгний дистрофи, архины хордлого, хүнцэл, фосфороор хордох, элэгний өтгөрдөг элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний үрэвсэл, элэгний цочмог болон элэгний дистрофи, архины хордлого, элэгний архаг хордлого Байна. Цусан дахь глюкозын концентраци буурч байгаа нь улаан хоолойн хорт хавдар, нойр булчирхайн гаднах локализаци (фиброма, фибросаркома, нейрома), мөн бөөлжих, хоолны дуршилгүй болох, элэгний чихрийн шижин, цус багадалт, жирэмсэн эмэгтэйчүүдэд өтгөн хатах, глюкозури зэрэг өвчтнүүдэд ихэвчлэн ажиглагддаг.

Сэтгэцийн гэмтэл, энцефалит, субарахноид цус алдалт, тархины хавдар зэргээс шалтгаалан гипогликеми нь төв гаралтай байж болно.

1. Нүүрс ус шингээх эмгэгийн өвчлөл.

2. Гиперглюкоземийн ямар төрлүүд танд мэдэгддэг вэ?

3. Эмгэг судлалын гипергликозын шалтгаан нь юу вэ?

4. Чихрийн шижингийн инсулин хамаарах шалтгаан юу вэ?

5. Удамшлын өвчний биохимийн шалтгаан юу вэ: а) гликогеноз? б) агликогеноз? в) фруктоземи? г) галактоземи?

6. Мацаг барих явцад нүүрс усны солилцооны биохимийн өөрчлөлтүүд юу вэ?

7. Глюкозын хүлцлийг тодорхойлох аргын зарчим.

Глюкозын оксидазын аргыг хэзээ хэрэглэх вэ?

Энэхүү туршилтыг элсэн чихрийн хүлцэл, урьдчилан сэргийлэлт, мөн өвчний өндөр түвшинд илрүүлэхэд ашигладаг. Гэхдээ ийм зорилгоор шинжилгээг маш ховор ашигладаг бөгөөд энэ нь өндөр өртөгтэй, үр дүнд удаан хүлээхтэй холбоотой юм. Ихэнх тохиолдолд энэ аргыг ашиглан цус, шээс дэх глюкозыг тодорхойлохдоо дараахь өвчнийг оношлоход ашигладаг.

Элсэн чихэр тэр даруй буурдаг! Цаг хугацаа өнгөрөх тусам чихрийн шижин нь харааны бэрхшээл, арьс, үсний байдал, шархлаа, гангрена, тэр ч байтугай хорт хавдрын хавдар гэх мэт олон төрлийн өвчинд хүргэдэг. Хүмүүс чихрийн түвшинг хэвийн болгохын тулд гашуун туршлагыг заадаг байв. унших.

• лактоз үл тэвчих синдром,
• фруктозгүй,
• фруктозын бие махбодийн шингэний шүүрэл,
• шээсэн дэх пентозын агууламж нэмэгдсэн.

Глюкозын оксидазын шинжилгээний эргэлзээгүй давуу тал нь түүний нарийвчлал юм.

Энэ аргын үндэс нь юу вэ?

Цусан дахь глюкозын агууламжийг тодорхойлох янз бүрийн аргууд байдаг боловч глюкозын оксидаз нь хамгийн зөв юм. Энэ нь элсэн чихрийн агаар мандлын хүчилтөрөгчтэй харилцан үйлчлэх үед урвалж нь исэлддэг гэсэн баримт дээр суурилдаг. Устөрөгчийн хэт исэл нь уусмалд гардаг. Энэ бодис нь өнгөт нэгдэл үүсгэхэд ortotoluidine-тай харилцан үйлчлэлцдэг. Энэ урвалын зан үйлийн хувьд тусгай фермент шаардлагатай байдаг. Исэлдэлтийн урвалын үед глюкозын оксидаза байх ёстой бөгөөд шингэнийг будаж байх үед пероксидаза заавал байх ёстой. Уусмалын өнгөний эрч хүч нь глюкозын агууламжаас хамаарах бөгөөд түүний өндөр агууламжаас хамгийн их байх болно.

Глюкозын оксидазын глюкозыг тодорхойлох мөн чанар

Үр дүнг үнэлэх нь ижил хугацааны дараа фотометрийн тоон аргыг ашигладаг. Тодорхой зарласан элсэн чихрийн хэмжээг агуулсан калибровкийн уусмалыг заавал хэрэглэх шаардлагатай бөгөөд үүнээс эхлэн та биеийн шингэн дэх глюкозын концентрацийг, ихэвчлэн цусан дээр шүүж болно.

Шинжилгээ хэрхэн явагддаг вэ?

Өвчтөнөөс хоосон ходоод дээр материалыг авдаг. Туршилтын хувьд венийн цусыг 5 мл-ийн хэмжээгээр хэрэглэдэг. Оношилгооны өмнөх өдөр өвчтөнд хатуу хоолны дэглэмийг зааж өгдөг. Ингэснээр үр дүнгийн найдвартай байдлыг үнэлэх боломжтой бөгөөд шинжилгээний алдаа гарахаас зайлсхийх боломжтой болно. Цус авахаас 2 хоногийн өмнө өвчтөн архи, тамхи татах муу зуршлаасаа татгалзах хэрэгтэй. Мөн хэт чихэрлэг хоол хүнс хэрэглэхийг хязгаарлаж, боломжтой бол стресстэй нөхцөл байдлаас зайлсхийх хэрэгтэй.

Цусан дахь сийвэнг олж авахын тулд цусыг центрифугалдаг.

Ихэнх тохиолдолд глюкозын концентрацийг тодорхойлох энэ аргыг центрифугалтаар хийдэг бөгөөд энэ нь элементийн элементүүд тусгаарлагдсан байдаг. Цусан дахь сахарын хэмжээг аль хэдийн тодорхойлсон байдаг. Шаардлагатай бүх урвалжийг нэмж оруулбал өрөөний температурт туршилтыг хийвэл 20 минутын дараа өнгө нь ажиглагдана. Глюкозын хэмжээг калибровкийн хуваарийн дагуу эсвэл порцын журмын дагуу хийдэг.

Судалгааны урвалжууд

Элсэн чихэр тодорхойлохын тулд цусан дахь глюкозыг тодорхойлох экспресс аргыг ашиглах нь хамгийн тохиромжтой. Энэ нь ашиглахад хялбар, хурдан үр дүнд хүрсэнтэй холбоотой юм. Үүнээс гадна, өвчтөн лабораторид эсвэл эмнэлэгт очих шаардлагагүй. Гэхдээ глюкозын оксидазын шинжилгээнээс ялгаатай нь ийм онош нь найдваргүй юм. Учир нь энэ нь глюкозыг бусад элсэн чихрээс ялгахгүй бөгөөд тэдгээрийн концентрацийг хамтад нь тодорхойлдог.

Глюкозын оксидазын урвалын үндэс нь натрийн хлорид 9% -ийн уусмал, цайрын сульфат 50% юм. Тэд цусыг центрифугалах үе шатанд нэмэгддэг. Үүнээс гадна цууны хүчил ба натрийн ацетат бүхий буферийн уусмалыг ашигладаг. Титрлэх арга нь түүний рН-ийг 4.8-д тодорхойлдог. Үүний дараа глюкозын оксидаза нэмж устөрөгчийн хэт исэл ба пероксидаза ялгарч, тодорхой үр дүнд хүрэхийн тулд уусмалыг хүссэн концентрацид будах ажилд оролцдог.

Шинжилгээний норм

Элсэн чихрийн хэмжилтийг тусгай нэгжид хийдэг - нэг литр уусмал дахь миллимоль.

Глюкозын оксидазын цусны шинжилгээ хоосон ходоодонд орж, үүнд плазма эсвэл ийлдэс хэрэглэнэ. Насанд хүрэгчдийн хувьд түүний тоо хэмжээ нь эмэгтэй, эрэгтэй хүмүүсийн аль алинд нь 3.3-5.5 байна. 15-аас доош насны хүүхдүүдийн хувьд энэ үзүүлэлт арай бага бөгөөд 3.2-5.3 хооронд хэлбэлздэг. Шинээр төрсөн нярайд цусан дахь сахарын хэмжээ 1.7-4.2 байна. Өвчтөнд чихрийн шижин өвчтэй болох эсвэл глюкозын хүлцэл буурсантай холбоотой үзүүлэлтүүд нэмэгдэж байна. Энэ нөхцөл байдал нь урьдчилан сэргийлэлт бөгөөд хэрэв цаг тухайд нь эмчлэхгүй бол удалгүй энэ хүнд хэлбэрийн эмгэгийг хөгжүүлэхэд хүргэдэг.

Чихрийн шижин өвчнийг эмчлэх боломжгүй хэвээр байна уу?

Одоо та эдгээр мөрүүдийг уншиж байгаагаас харахад өндөр цусан дахь сахарын эсрэг тэмцэлд ялалт таны талд байхгүй байна.

Эмнэлэгт хэвтэх эмчилгээний талаар та аль хэдийн бодож байсан уу? Энэ нь ойлгомжтой, учир нь чихрийн шижин бол маш аюултай өвчин бөгөөд хэрэв эмчлэхгүй бол үхэлд хүргэж болзошгүй юм. Тогтмол цангах, хурдан шээх, хараа муудах. Эдгээр бүх шинж тэмдгүүд нь таны өмнө сайн мэддэг.

Гэхдээ үр нөлөөг биш харин шалтгааныг нь эмчлэх боломжтой юу? Одоогийн чихрийн шижингийн эмчилгээний талаархи нийтлэлийг уншихыг зөвлөж байна. Нийтлэлийг уншина уу >>